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ELISA試劑盒擁有兩大洗滌方法你可記清楚了
日期：2021-01-27瀏覽：1503次
ELISA試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心酶標(biāo)免疫分析法測(cè)定標(biāo)本中AIF水平。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入AIF抗原、生物素化的抗小鼠AIF抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過(guò)*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的AIF呈正相關(guān)。
洗滌雖不是一個(gè)反應(yīng)步驟，但卻也決定著實(shí)驗(yàn)的成敗。ELISA靠洗滌來(lái)達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過(guò)洗滌以清除殘留在板孔中沒(méi)能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)，以及在反應(yīng)過(guò)程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
ELISA試劑盒洗滌的兩大方法：
一、浸泡式
1.吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液；
2.用洗滌液過(guò)洗一遍(將洗滌液注滿(mǎn)板孔后，即甩去)；
3.浸泡，即將洗滌液注滿(mǎn)板孔，放置1-2分鐘，間歇搖動(dòng)，浸泡時(shí)間不可隨意縮短；
4.吸干孔內(nèi)液體。吸干應(yīng)*，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干；
5.重復(fù)操作c和d，洗滌3-4次(或按說(shuō)明規(guī)定)。在間接法中如本底較高，可增加洗滌次數(shù)或延長(zhǎng)浸泡時(shí)間。
二、流水沖洗式
初用于小珠載體的洗滌，洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來(lái)水。洗滌時(shí)附接一特殊裝置，使小珠在流水沖擊下不斷地滾動(dòng)淋洗，持續(xù)沖洗 2分鐘后，吸干液體，再用蒸餾水浸泡2分鐘，吸干即可。浸泡式猶如盆浴，流水沖洗式則好比淋浴，其洗滌效果更為*，且也簡(jiǎn)便、快速。已有實(shí)驗(yàn)表明，流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌。洗滌時(shí)設(shè)法加大水流量或加大水壓，讓水流沖擊板孔表面，洗滌效果更佳。
